DESCRIPCIÓN

El sistema supone la clonación en tandem de varios fragmentos genómicos distintos en un mismo vector plasmídico lo cual permite la síntesis en la misma reacción de transcripción, de una única sonda de RNA o DNA. La invención reúne por un lado, la sensibilidad que confiere la hibridación molecular y por otro, permite disminuir los costes y el tiempo necesarios para la realización de los análisis. Es de aplicación principalmente en el campo del Fitodiagnóstico y en la detección de organismos modificados genéticamente.

Para la obtención de una polisonda se amplifican mediante PCR fragmentos genómicos representativos de la secuencia que se quiera detectar. El tamaño mínimo de los mismos puede ser como de 50 pares de bases aunque para tener una mayor sensibilidad es recomendable utilizar fragmentos en torno a las 200 pares de bases (pb). El número de las sondas individuales que se pueden incluir en la polisonda depende por un lado del tamaño de las mismas y por otro lado del tamaño del insertos máximos que permita el vector escogido, hasta 1200 bases podrían utilizarse sin ningún problema.

Una vez obtenido el clon, se genera la polisonda. Dependiendo de si se trata de polisondas de RNA o DNA se utilizará un enzima u otro y un sistema de detección basado en el marcaje de oligonucleótidos radiactivos, digoxigenina, biotina o cualquier otro método de marcaje estándar que se escoja. Se realiza la extracción de RNA/DNA en función de la estrategia elegida, utilizando un protocolo estándar, ligeramente modificado o uno específico desarrollado para un determinado material. El método descrito es el dot blot que utiliza membranas de nylon, aunque sería factible adaptarlo a nitrocelulosa. Pero también podría aplicarse a pocillos (titer, microtiter)o en vidrio (microchips) o cualquier método colorimétrico..

ASPECTOS INNOVADORES

La principal característica de esta innovacón es el uso de secuencias específicas para identificar virus de las plantas, organismos genéticamente modificados (OGM), contaminantes o cualquier otro marcador. Puede ser usado como método de control de entrada de aceptación o rechazo de producto.

VENTAJAS COMPETITIVAS

Otros métodos requieren de la PCR y de un especialista encargado de los análisis. La polisonda puede ser diseñada a medida para cada problema industrial. Por ejemplo, la autenticación del atún enlatado, la determinación de virus libres en viveros, organismos genéticamente modificados libres en la producción de alimentos orgánicos, identificación de plantas/variedades en aduanas o en protección de variedades vegetales.

Las ventajas más importantes del procedimiento expuesto son la alta sensibilidad y la rapidez junto con la posibilidad de cuantificar el producto inicial, además de la especificidad y que es un método simple.

PALABRAS CLAVE

Polisonda, detección, secuencias nucleotídicas, clon, hibridación molecular, PCR, blot dot.

SOLICITUD DE PATENTE

200402758, solicitada a 2004-11-16

PERSONA DE CONTACTO

Teresa Jiménez
mail: teresa.jimenez@dicv.csic.es
teléfono: +34 96 362 27 57

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